观察骨组织成熟过程的染色方法

观察骨组织成熟的过程,是骨科领域必不可少的研究内容。

很多时候,我们必须要区分新生骨、成熟骨,有时还涉及到软件测算,常规HE染色显然无法完全满足要求。

那么,什么方法最好呢?

今天小编就聊一聊骨组织Masson染色及各种细节。

01

骨HE染色的缺陷

一般来说,如果仅仅是为了观察骨组织结构,HE染色是可以胜任的,并且执行起来也很简便。

HE染色可以很好地区分骨组织结构、骨髓腔中的细胞(红系、粒系、巨核系、骨膜上的成骨细胞、腔中的破骨细胞、脂肪细胞)。如果仅仅观察性研究,采用HE是完全可以的,镜下也基本能够区分这些细胞类型。

然而,现在很多科研指标需要量化评价,即咱们常说的半定量研究。特别是研究骨折后骨痂形成过程时,我们必须采用特殊染色才可以半定量研究。

其中,小编是首推Masoon染色的。

02

为什么选Masson染色

常规认识来看,Masson染色是用来显示结缔组织中的胶原,胶原被标记为绿或色者蓝色,其它组织染色为红色。

骨组织中主要存在1型胶原。

骨折后修复阶段,经Masson染色后,不同修复时期的骨基质中胶原纤维呈现红-绿相间。在骨折修复早期,红染区域较少,骨细胞核成骨细胞周围的绿染区域较多。修复后期,染色区域逐渐增大而绿染区域逐渐减少,表面成熟的骨组织在逐渐增多。

染色后效果如下↓

(甲苯胺蓝标记)

(甲基绿标记)

有了如此高的对比度,不采用Image Pro Plus计算一下都觉得可惜了。

03

骨Masson染色注意事项

骨组织Masson染色步骤是比较简单的,参照市售试剂的说明书操作进行染色即可,这里不再赘述。主要是想分析一下染色异常的原因,已方便大家改进。

(1)染色切片预处理

小编在上一篇推文中说过,骨组织不同于一般性组织,想要染色好看,必须得控制脱钙环节。
如果脱钙不充分,或者脱钙后未充分清除残留的酸性脱钙液,那么后期所有的染色都会出现色差甚至根本无法染上色。因为病理染色很重要的一点就是要控制切片的PH值,对于Masson染色来说尤其如此,保持切片PH为中性是很有必须的。
此外,尽管存在不脱钙骨组织染色法,但是小编个人还是推荐脱钙后再进行Masson染色。

(2)切片厚度

小编推荐骨组织切片为4μm。太厚则后期染色极易脱片,就算不脱片也会造成染色过深,结构不清晰。太薄,无法完全显示出骨组织的各个层面精细结构。

(3)染色后脱水过程

很多的说明书或者文献都会说要梯度乙醇脱水,一般是50%、70%、80%、90%、100%、再次100%。

但坦诚来讲,这种梯度会洗掉切片的染色。于是很多人会发现,刚染完的切片在镜下挺好看,但是脱水、二甲苯后封片再看,会发现切片颜色变淡了,尤其胶原表达不多的骨组织更是如此。所以小编的经验是如果染色较浅,就尽量不要在低浓度乙醇中停留太多时间,尽快转至高浓度乙醇。

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