文献解读:检测TBEV感染在小鼠和人类神经细胞中诱导的先天免疫反应

摘要

蜱传脑炎(TBE)是由蜱传脑炎病毒(TBEV)引起的一种严重的神经病理疾病。脑TBEV感染以广泛的病理性神经炎为特征。TBEV导致中枢神经系统破坏的机制尚不清楚,但越来越多的证据表明,它既涉及到病毒感染对神经元的直接损害,也涉及到免疫反应造成的间接损害。在这里,我们的目标是检测TBEV感染在小鼠和人类神经细胞中诱导的先天免疫反应。我们还比较了幼稚和感染的神经细胞和星形胶质细胞之间的细胞因子/趋化因子通讯。

研究结果

图1

图1:蜱传脑炎病毒(TBEV)感染小鼠血清和器官中的病毒滴度和细胞因子/趋化因子水平。雌性BALB/c小鼠皮下接种~500PFU的TBEV,分别于第1、3、5、7、9天处死。收集血清、脾脏和脑样本,用于病毒滴定和细胞因子/趋化因子测定。

A:感染小鼠血清样本中的病毒滴度(虚线;检测阈值为1.2log10pfu/mL)。

B:脾脏和脑组织悬液中病毒滴度(虚线,脑的检测阈值为1.8log10pfu/g,脾脏的检测阈值为1.2log10pfu/g)。

C:采用MILLIPLEX MAP小鼠细胞因子/趋化因子磁珠比色法测定多种细胞因子、趋化因子、集落刺激因子和生长因子的水平。星号表示与未感染的对照组相比在统计学上有显著差异。

 

图2

图2:感染蜱传脑炎病毒(TBEV)的小鼠血清(a,c,e)和脑组织(b,d,f)中选定的细胞因子/趋化因子的产生动态。

雌性BALB/c小鼠皮下接种~500PFU的TBEV,分别于第1、3、5、7、9天处死。采用MILLIPLEX MAP小鼠细胞因子/趋化因子磁珠比色法测定血清和脑组织中细胞因子/趋化因子水平。显示了CXCL10(a,b)、G-CSF(c,d)和IL-6(e,f)的产生动力学。

图3

图3:蜱媒脑炎病毒(TBEV)在SK-N-SH和HBCA细胞中的生长和细胞因子/趋化因子的产生。

用TBEV(m.o.i.)感染SK-N-SH或HBCA细胞。=1),每隔一定时间收集无细胞培养上清液。上清用空斑试验分析病毒滴度,或分析细胞因子/趋化因子浓度。TBEV在SK-N-SH细胞(A)和HBCA细胞(B)中的生长。

使用Luminex平台的人细胞因子磁性30-Plex面板分析了TBEV感染、未感染和模拟感染(紫外线灭活病毒)SK-N-SH细胞(C)和HBCA细胞(D)的上清中多种细胞因子、趋化因子和生长因子的水平。星号表示与未感染的对照组相比在统计学上有显著差异。

图4

图4:用蜱传脑炎病毒(TBEV)感染的SK-N-SH的培养上清治疗幼稚的HBCA细胞。实验方案。

分别于第1天(处理a)和第3天(处理b),收集TBEV感染和模拟感染SK-N-SH细胞的上清。并清除了病毒。然后,将HBCA与脱毒的SK-N-SH上清液孵育4h,在处理后第1天和第5天收集细胞培养上清液,用Luminex平台的人细胞因子磁性30-Plex面板进行细胞因子/趋化因子的测定。星号表示与未感染对照相比在统计学上有显著差异(B)。用SK-N-SH上清液与HBCA细胞孵育4h后,用TBEV(m.o.i)感染HBCA细胞。=1)。在第0、1和5天,收集上清液,用于病毒滴度(C)的测定。细胞存活率也进行了评估(D)。**p<0.001;*p<0.0001

 

图5

图5用蜱传脑炎病毒(TBEV)感染的HBCA的培养上清治疗幼稚的SK-N-SH细胞。

A:实验方案。分别于第1天(处理a)和第5天(处理b),收集TBEV感染和模拟感染HBCA细胞的上清。然后清除了病毒。SK-N-SH与脱毒HBCA上清液孵育4h,处理后第1天和第3天收集细胞培养上清液,用Luminex平台的人细胞因子磁性30-Plex面板进行细胞因子/趋化因子测定。星号表示与未感染对照相比在统计学上有显著差异(B)。SK-N-SH细胞与HBCA上清液孵育4h后,用TBEV(m.o.i)感染SK-N-SH细胞。=1)。分别于第0、1、3天采集上清液,测定病毒滴度(C)。细胞存活率也进行了评估(D)。**p<0.001;*p<0.0001。

结论

我们的结果表明,在TBEV感染的脑组织中,神经元和星形胶质细胞都是促炎细胞因子的潜在来源。感染/激活的星形胶质细胞产生细胞因子/趋化因子,刺激神经元的先天免疫反应,限制病毒复制,增加受感染神经元的存活率。

DOI:10.1186/s12974-019-1596-z

参考文献

[1].Bogovic P, Strle F. Tick-borne encephalitis: a review of epidemiology, clinical characteristics, and management. World J Clin Cases. 2015;3(5):430–41.

[2].Simmonds P, Becher P, Bukh J, Gould EA, Meyers G, Monath T, Muerhoff S, Pletnev A, Rico-Hesse R, Smith DB, Stapleton JT, ICTV report consortium. ICTV virus taxonomy profile: flaviviridae. J Gen Virol 2017;98(1):2–3.

[3].Růžek D, Avšič Županc T, Borde J, Chrdle A, Eyer L, Karganova G, Kholodilov I, Knap N, Kozlovskaya L, Matveev A, Miller AD, Osolodkin DI, Överby AK, Tikunova N, Tkachev S, Zajkowska J. Tick-borne encephalitis in Europe and Russia: review of pathogenesis, clinical features, therapy, and vaccines. Antivir Res. 2019 Apr;164:23–51.

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