Universal ProbeLibrary在线引物设计PCR引物(物种齐全)

1、ID查询

这里我们以“human p53”为例,进行引物设计。
点击进入PubMed
网站:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed

进入PubMed网页后,首先我们可以在搜索栏中选择核苷酸,再输入基因+物种+mRNA,最后点击搜索开始检索。

然后会出现上图所示的界面,这时候我们可以单击选择mRNA选项。
如下图所示,此条目为我们所寻找的p53 human mRNA。

2、设计RT-qPCR三步走

进入网址:

https://lifescience.roche.com/en_cn/brands/universal-probe-library.html#assay-design-centre
进入首页后,我们单击选择Assay Design Center”选项。

设计RT-qPCR分为以下3步:

第一步:点击下拉框选择物种,目前这个网站支持human以及多种模式生物。

第二步:输入基因名、基因号或基因序列;如:输入p53的序列ID:AB082923.1。

然后点击选择是否需要跨越内含子设计。

第三步:点击“设计引物”键即可。

3、选择转录本
这里我们以搜索“GAPDH”为例。
如下图所示,如果输入的是基因名,则会出现了若干个转录本,选择你需要的转录本,然后点击勾选。然后点击页面最右下角的“设计引物”键。

4、跨内含子区域计算
有的时候软件计算发现没有好的跨内含子区域的引物,这时它会询问你是否继续,点击“here ”继续即可。

5、引物序列输出
引物序列,最后合成即可。

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