lncRNA同源盒A簇反义RNA2(HOXA-AS2)的生物学功能及其在OS进展中的机制

摘要

骨肉瘤(OS)是最常见的骨恶性肿瘤之一。长非编码RNA(LncRNAs)参与了包括OS在内的多种癌症的发生。本研究旨在探讨lncRNA同源盒A簇反义RNA2(HOXA-AS2)的生物学功能及其在OS进展中的可能机制。

研究结果

 

图1

图1:HOXA-AS2在骨肉瘤中的表达增加。

(A)采用qRT-PCR方法检测Hoxa-AS2在骨肉瘤组织和正常骨肉瘤组织中的表达,n=27。

(B)分析HOXA-AS2高表达组(n=15)和低表达组(n=12)患者的生存率。

(C)采用qRT-PCR方法检测骨肉瘤细胞中HOXA-AS2的表达水平。*P<0.05。

图2

图2:Hoxa-AS2基因敲除抑制骨肉瘤进展。将si-NC或si-HOXA-AS2转染U2OS和MG-63细胞。用qRT-PCR、CCK-8和Transwell检测转染细胞HOXA-AS2的表达(A和B)、细胞活力(C和D)、迁移和侵袭(E和F)。*P<0.05。

图3

图3:miR-124-3P与HOXA-AS2绑定。

(A)HOXA-AS2和miR-124-3p的潜在结合位点。

(B和C)检测共转染miR-124-3p或miR-NC和HOXA-AS2WT或HOXA-AS2mut的U2OS和MG-63细胞的荧光素酶活性。

(D)Ago2RIP后,检测转染miR-124-3p或miR-NC的两种细胞中HOXA-AS2的富集情况。

(E和F)RNA下调后,U2OS和MG-63细胞中均检测到miR-124-3p的表达。

(G和H)qRT-PCR检测miR-124-3p在骨肉瘤组织和细胞中的表达。

(I)分析骨肉瘤患者血清HOXA-AS2和miR-124-3p水平的相关性。

(J)用qRT-PCR检测转染si-NC或si-HOXA-AS2的U2OS和MG-63细胞miR-124-3p的表达水平。*P<0.05。

 

图4

图4:miR-124-3p的缺失逆转了沉默HOXA-AS2诱导的骨肉瘤进展的抑制作用。将si-NC、siHOXA-AS2、si-HOXA-AS2和in-miR-NC或in-miR-124-3p转染U2OS和MG-63细胞。用CCK-8或Transwell-well法检测细胞存活率(A和B)、迁移和侵袭(C和D)。*P<0.05。

图5

图5:E2F3由miR-124-3P和HOXA-AS2调节。

(A)miR-124-3P和E2F3的结合位点。

(B和C)检测转染miR-124-3p或miR-NC和E2F3WT或E2F3mut的骨肉瘤细胞的荧光素酶活性。

(D和E)采用qRTPCR检测骨肉瘤组织和细胞中E2F3mRNA的表达。

(F和G)Western blot检测转染miR-NC、miR-124-3p、si-NC或si-HOXA-AS2的细胞E2F3蛋白水平。

(h和i)研究患者E2F3mRNA水平与miR-124-3p和HOXA-AS2表达的关系。*P<0.05。

图6

图6:miR-124-3p的敲除逆转沉默E2F3介导的骨肉瘤进展抑制。将si-NC、siE2F3、si-E2F3和in-miR-NC或in-miR-124-3p转染U2OS和MG-63细胞。检测两种转染细胞的细胞存活率(A和B)和迁移和侵袭(C和D)。*P<0.05。

图7

图7:抑制HOXA-AS2通过调节miR-124-3P和E2F3减轻异种移植瘤生长。用sh-NC或sh-HOXA-AS2感染U2OS细胞,然后将稳定转染的细胞导入裸鼠体内。

(A)每周测量肿瘤体积。

(B)观察终点肿瘤重量。

(C-E)检测肿瘤组织中HOXA-AS2、miR-124-3p和E2F3蛋白的表达。*P<0.05。

结论

总之,我们的研究结果总结了HOXA-AS2基因敲除对OS发育的治疗作用,可能是通过靶向miR-124-3p和E2F3。本研究首次提供了HOXA-AS2/miR-124-3p/E2F3的CERNA调控网络,表明HOXA-AS2是治疗OS的新靶点。

DOI:10.2147/OTT.S220072

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