怎样从用室温RNAlater保存的骨中提取高质量的RNA?

在开展基因功能研究和基因表达研究等科研工作中,需要获取足够量和高质量的RNA,以开展后续的实验。我们通过前两期的文章,分别讨论了从动物内脏高效提取高质量RNA的方法从富含色素样本中提取高质量的RNA方法本期,我们同样通过一篇文献,分享如何从用室温RNAlater保存的骨中提取高质量的RNA。

2019年5月,Kim B. Pedersen等在Bone Reports杂志发表题为Improved method for isolating high-quality RNA from mouse bone with RNAlater at room temperature的文章,阐述从室温RNAlater保存的小鼠骨中提取高质量RNA的改进方法。

骨骼中的基因表达分析的前提是要求能够从骨中分离出高质量的RNA。从冷冻骨组织中分离完整的RNA是存在问题的,因为RNA在解冻过程中会迅速降解。作者对评估骨髓和骨的基因表达很感兴趣,因此开发了一种简单、可靠且经过统计学验证的方法:从小鼠股骨和股骨骨髓中提供高质量的RNA。

作者根据TRI Reagent所提供的方法分离出总RNA。

通TRI Reagent或结合TRI Reagent中的组织裂解和RNeasy Mini Kit柱(Qiagen)相分离后的水解酶的混合方法分离总RNA。用TRI Reagent中的钢珠压碎骨组织,使用TissueLyser II仪器(Qiagen)设定为30strokes/s,持续2–4分钟。使用1-溴-3-氯丙烷进行相分离。在混合法中,水相与70%(v/v)乙醇混合,并应用于RNeasy柱。RNA提取操作的详细方法如下:

用RNAlater保存的骨组织可防止RNA降解

作者发现RNAlater保存方法显著提高了RNA的质量,股骨的RIN值为8.0、股骨骨髓的平均RIN值为9.6。这种方法也可以从腰椎中分离出高质量的RNA,平均RIN值为9.3。使用RNAlater的另一个优点是,组织解冻到室温的过程中,不会丢失RNA的完整性。

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