q225高级热循环设置详解

Quantagene q225荧光定量PCR仪配备了许多实用的功能。今天要给大家详细讲一讲高级热循环设置(Advanced Cycling)功能的使用方法。

    q225默认的热循环程序模板,支持最多6个步骤和100个循环,足够满足绝大部分用户的使用需求。但是一些应用中,可能需要前几个循环设置不同的反应条件,例如样本为gDNA时升高前几个循环的解链温度,或为提高扩增特异性而升高前几个循环的退火温度等。这时候可以使用q225软件中的高级热循环设置功能。

    后文的设置说明将以如下热循环程序为例:

第1-5个循环,:98℃ 10s, 65℃ 30s;
第6-40个循环:95℃ 5s, 60℃ 15s。

01

启动高级热循环设置功能

在q225操作软件的菜单中选择

 温度配置高级热循环设置

打开后弹出高级热循环设置对话框

勾选 启用高级热循环设置

02

设置第1组循环

在左侧的编辑区域输入第1组循环,例如:

循环步骤数为2
第一步解链:98℃, 10s;
第二步退火+延伸:65℃, 30s;
循环数为5;
在第2步采集荧光信号。

完成后点击 应用

03

加入第2组循环

单击 插入 按钮,增加一组新的循环

在左侧的编辑区域输入第2组循环:

循环步骤数为2
第一步解链:95℃, 5s;
第二步退火+延伸:60℃, 15s;
循环数为35;
在第2步采集荧光信号。

完成后点击 应用

04

查看和编辑

在右侧的表格中可以看到每一组热循环的详细配置。

通过单击左侧的 插入  删除 按钮,来新增和删除组。

通过单击右侧表格,或者单击左侧组名两边的箭头,来切换当前编辑的温度组。

编辑完成后不要忘记点击 应用 按钮,使得更改生效哈~

完成全部设置后,点击 确认 按钮。

05

开始实验

返回主界面,可以看到原本设置循环温度和时间的区域,已经提示启用了高级热循环设置。

接下来就可以正常开始实验啦!

高级热循环设置

 最多支持10组循环

 每组循环支持最多6个步骤,循环数最多100

 即总共支持最多1000个循环

00

另一种选择

如果在40个循环前,想要额外增加3个循环进行预扩增,预扩增阶段的温度设置与循环阶段的温度设置不同,且预扩增阶段不采集荧光(不参与Ct值计算)。

此时可以考虑在 “循环前” 步骤中开启循环功能

勾选 循环前中的 开启循环选项。

例如需要设置的温度参数为:

热激活:95℃, 60s;
预扩增循环:3个循环, 不采集荧光信号, 98℃ 10s, 65℃ 30s;
扩增循环:40个循环, 95℃ 5s, 60℃ 15s, 采集荧光。

则按照下图进行设置,在开启循环下方,设置循环步骤为2-3,共3循环。

以上两个功能默认不开启

如有需要请联系技术支持为您开启

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