q225试剂与体系适应性常见问题

q225的反应体积?

推荐5-10μl的总体积,在这个范围内能够最好的保持q225的优点,兼顾节省与操作简便。如果用户需要,在1-20μl的范围内q225均有准确的结果。

之前用96孔常规孔板20-25 μl体系,使用q225时用5-10μl体系如何设定程序?

可以设定成一样的程序。也可以尝试温度不变,每个步骤少5-30 s。原因是孔壁和液体厚度变薄,贴合也更好,液体能够更快达到设定温度。

q225默认程序是2步法的qPCR,可以用3步法吗?

可以,在设置程序时把循环步骤改成3步就行。但是根据我们的经验,除非引物设计不理想,或者扩增长度较长,否则大部分的qPCR反应用两步法都可以得到很好的结果。

q225能用哪些qPCR试剂?

根据我们的测试,绝大多数的市售双链染料(SYBR Green,EvaGreen,LC Green…)和使用探针的qPCR mix都可以使用。如果需要推荐具体型号,请联系技术支持。

哪些荧光基团的探针可以用?

对于q225单通道版仪器,大多数激发在450-550nm,发射在500-600 nm(常见的如FAM,VIC,HEX等)的探针均可以使用。常见的FAM/VIC/HEX的探针合适浓度范围一般在50 nM-500 nM之间。不同的荧光探针信号可以在同一次运行中读取。

q225MX的两个光学通道激发峰值位于475nm及520nm, 检测峰值位于525nm及570nm。通道1适用FAM,Alexa488等,通道2适用VIC, HEX, JOE, Cy3等。q225MX在出厂时已内置FAM, SYBR Green, VIC, HEX四种常用qPCR染料的光谱校准数据,可以无缝适配相应试剂直接使用,支持每孔中对两个基因进行双重定量。如需使用其它光谱近似的荧光染料进行双重 qPCR定量,q225MX也支持自行添加新染料的光谱校准数据。

试剂需要加ROX吗?可以加ROX吗?

q225不需要ROX来做光学校正,而是通过曲线拟合来校正,效果一般优于ROX校正。

如果用户的试剂中含有ROX,无论是high ROX还是low ROX均不会影响结果。

我的检测体系用了10年了,现在换成q225的默认程序,是很快,但怎么Ct偏大?

许多早期开发的试剂(2005年前)热激活步骤需要较长的时间,例如5-10 min。此时用q225的默认热激活时间(2 min)效果不好。将热激活时间设成10 min就好了。大部分快速qPCR试剂热激活步骤时间在1-3 min,使用q225的默认程序即可。

q225程序需要设定反应体积吗?

不用。q225的液体体积很小,且贴合好,孔壁薄,传热快,无需根据反应液体积来改变温度曲线。

我之前在q225上用10 μl体系,现在省试剂变成5 μl体系,所有组分配比完全一样,q225的Ct会变吗?

不变(一般差别在0.1以内)。

我配了一份mix,包括了样品。有的孔加10 μl,有的孔加3 μl,Ct值会一样吗?

如果模板的浓度不太低(不是每孔中只有几个模板分子),Ct基本上是一样的。

基础实验

Western Blot内参抗体蛋白的选择原则

2020-8-14 23:35:56

基础实验

反复冻融对血浆有什么影响?

2020-8-14 23:36:57

0 条回复 A文章作者 M管理员
    暂无讨论,说说你的看法吧
个人中心
购物车
优惠劵
今日签到
有新私信 私信列表
搜索