定量PCR的数学原理

PCR动力学曲线和四个阶段
• 右图反映的是随着PCR反应的进行相应的荧光信号的变化,比较直观,但是指数期很短。
• 左图反映的是荧光信号变化量的对数与PCR反应循环数的关系。

指数增长期内扩增曲线具有高度重复性:

定量PCR扩增曲线的各种概念:

1. 什么是基线?
•   基线:在PCR扩增反应的最初的几个循环中,荧光信号变化不大,变化趋势接近于一条直线,即扩增曲线的水平部分,这样的直线就是基线

2. 什么是阈值?

3. 什么是Ct值?

•   相同的模板进行96次扩增,终点产物不恒定;Ct值则极具重现性
    分析定量时候一般取Ct:15-35。太大或者太小都会导致定量的不准确

4. 如何使用Ct值计算结果?
绝对定量:检测起始模板数的精确拷贝数,通常需要用到标准曲线

相对定量:在一个样本中,目的基因相对于对照基因的量的变化

Ct值定量的数学原理:

 

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定量PCR的化学原理

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